SURE Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態細胞

產品標簽：

SURE；SURE-2；Stbl3；Stable；Direct repeats 正向重復片段；Retroviral sequences 逆轉錄病毒序列；Stratagene;

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產品組分：

菌株描述

SURE菌株是Agilent (Stratagene)公司開發，特別設計用于克隆在傳統的大腸桿菌菌株中“無法克隆"的某些DNA段。SURE菌株破壞了重組酶系統整條通路上的組分，這些組分能催化重組和刪除體內的非標準二級和三級結構，包括十字形（由反向重復序列引起）和Z字形的DNA，經常出現在真核生物DNA中，能阻止真核DNA克隆進入傳統大腸桿菌菌株中。SURE含限制缺陷（McrA^-, McrCB^-, McrF^-, Mrr^-, HsdR^-），使其無法對外源DNA進行標記和限制，從而提高外源甲基化DNA的克隆效率。也含內切酶缺陷（endA），和重組缺陷（recB recJ），提高了外源DNA的穩定性。存在于F′因子上的lacI^q ZΔM15使菌株適用于藍白斑。菌株本身含卡那霉su（Kan^R）和四環素（Tet^R）特性。

SURE菌株基因型：e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F′ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)].

產品描述

本品是SURE菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率＞5×10⁸ cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

注意事項

1）   感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2）   zui號在冰上融化感受態細胞。

3）   進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4）   轉化高濃度質粒或高效率連接產物可相應降低zui終用于涂板的菌量。

5）   菌株本身含卡那霉su和四環素特性，攜帶此兩種抗性的質粒不適合克隆到SURE細胞。當攜帶抗霉素抗性基因（Cam^R）的質粒轉化進入SURE細胞，使用添加100μg/ml氯霉su的LB固體平板來篩選克隆子。SURE細胞本身能耐受＜40μg/ml氯霉su，但對100μg/ml 氯霉su很敏感。

6）   為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

7）   采用常規操作流程轉化SURE感受態細胞，轉化效率可達5×10⁸ cfu/μg DNA。若是對轉化效率要求更高，可使用標準操作流程。

8）   產品包裝內含質粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供對照實驗用。

9）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常規操作流程【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

標準操作流程【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1）   冰上提前預冷14ml BD Falcon聚丙烯圓底離心管， 42℃預熱SOC培養基。

2）   從-80℃取出感受態細胞迅速置于冰浴中5min使其*融化。用手輕彈混勻吸取100 μl細胞到預冷的14ml離心管內。

3）   加1.7μl β-ME（1.42M）到細胞內。【β-ME能提高轉化效率】

4）   輕彈管子。置于冰上孵育10min，每2min輕彈混勻細胞一次。

5）   往細胞內加入0.1-50ng目的DNA，輕彈混勻細胞，冰上靜置孵育30min。

6）   42℃熱激45s，熱激過程的持續性非常重要。冰上靜置2min，此過程不要搖動離心管。

1）   向每個離心管中加入900 μl預熱的無菌SOC培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，225-250 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

2）   吸取≤200 µl 轉化菌液，加到含相應抗生素的LB固體瓊脂培養基上（若需要顏色反應，平板含IPTG+ X-gal），用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃過夜培養。【注意：若是進行藍白斑篩選，37℃至少培養17h，使得顏色能生成。另外將平板置于4℃孵育2h，能加強顏色反應?！?/span>

附表1 固體和液體LB培養基配方

附表2 固體和液體2-YT培養基配方

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

SURE化學感受態細胞（熱激法） SURE化學感受態細胞（熱激法）